虽然胰岛素瘤的诊断标准清楚明了，但是有些病人的症状并不典型，所以需要与其他症状相似疾病进行鉴别诊断，可做血糖测定、胰岛素测定、甲磺丁脲（D860）激发试验、胰高血糖素实验、L-亮氨酸试验、钙剂激发试验、血清C-肽测定等，这些测定都对胰岛素瘤的鉴别诊断都有帮助，并有助于排除其他低血糖的原因。另外，由于胰岛素瘤瘤体较小，位置不恒定，可做B超、电子计算机断层扫描（CT）、核磁共振（MRI）、腹腔动脉造影、选择性门静脉系统分段取血（SPVS）、选择性动脉注射美蓝等定位诊断技术的检查，可正确判断肿瘤的位置。