胰岛素瘤根据典型的Whipple三联症诊断多无困难，即：

　　①自发性周期性发作低血糖症状、昏迷及其精神神经症状，每天空腹或劳动后发作者；

　　②发作时血糖低于2.78mmol/L；

　　③口服或静脉注射葡萄糖后，症状可立即消失。

　　但是，有些病人的症状并不典型，可做血糖测定、胰岛素测定、甲磺丁脲（D860）激发试验、胰高血糖素实验、L-亮氨酸试验、钙剂激发试验、血清C-肽测定等都对胰岛素瘤的诊断有帮助，并有助于排除其他低血糖的原因。
   
　　由于胰岛素瘤瘤体较小，位置不恒定，可做B超、电子计算机断层扫描（CT）、核磁共振（MRI）、腹腔动脉造影、选择性门静脉系统分段取血（SPVS）、选择性动脉注射美蓝等定位诊断技术的检查，可正确判断肿瘤的位置。